一、研究背景

食品安全是公共衛生領域的核心議題，而微生物污染是引發食品安全問題的主要因素之一。傳統微生物檢測依賴平板計數法，需經過培養、分離、鑒定等步驟，檢測周期長達24-72小時，難以滿足食品生產過程中實時監控、快速放行及應急檢測的需求。因此，開發高效、便捷的微生物快速檢測技術成為食品安全領域的研究熱點。

二、材料與方法

（一）檢測對象

選取四類典型食品作為檢測基質，覆蓋不同加工類型與微生物污染風險。

1、生鮮食品：雞肉、生菜

2、加工肉制品：火腿腸、培根

3、乳制品：鮮牛奶、酸奶

4、飲料：瓶裝純凈水、果汁

（二）儀器與試劑

1、核心儀器：博清生物熒光計。

2、配套試劑：檢測試劑盒。

3、對照儀器：生化培養箱、菌落計數器。

（三）實驗步驟

1、樣品前處理：稱取25g樣品，加入225mL無菌生理鹽水，均質振蕩10分鐘，制成1:10樣品勻液，根據污染情況進行梯度稀釋。

2、提取：取1mL樣品勻液，加入0.1mL裂解液，室溫靜置2分鐘，裂解微生物細胞釋放ATP。

3、熒光檢測：向裂解后的樣品中加入0.1mL熒光素-熒光素酶試劑，混勻后立即放入博清生物熒光計，檢測并記錄熒光信號值（RLUs）。

4、對照實驗：同時采用平板計數法對樣品進行微生物總量測定，37℃培養48小時后計數，結果以CFU/g（mL）表示。

5、數據校準：以平板計數法結果為基準，建立熒光信號值（RLUs）與微生物濃度（CFU/mL）的標準曲線。

（四）評價指標

1、檢測時間：記錄從樣品前處理到獲得檢測結果的總時長。

2、準確性：計算熒光計檢測結果與平板計數法結果的相關性系數（R2）。

3、靈敏度：確定儀器可穩定檢測的最低微生物濃度。

4、重復性：對同一濃度樣品進行6次平行檢測，計算相對標準偏差（RSD）。

三、結果與分析

（一）檢測效率對比

博清生物熒光計與傳統平板計數法的檢測時間差異顯著。

1、博清生物熒光計：從樣品前處理到出結果，總耗時僅15-20分鐘，其中儀器檢測環節僅需10秒。

2、傳統平板計數法：需48小時培養周期，加上前處理與計數操作，總耗時超過50小時。

（二）準確性與相關性

通過對不同濃度微生物樣品的檢測，建立了博清生物熒光計的標準曲線。

1、標準曲線方程為：y=0.023x+12.5（y為熒光信號值RLUs，x為微生物濃度CFU/mL），相關性系數R2=0.986，表明兩者具有極強的線性相關性。

2、對實際食品樣品的檢測結果顯示，熒光計檢測值與平板計數法結果的相對誤差均小于10%，滿足食品安全檢測的準確性要求。

（三）靈敏度與重復性

1、靈敏度：博清生物熒光計的最低檢測限為102CFU/mL，可有效檢出食品中低濃度微生物污染，符合食品衛生標準中對微生物限量的檢測需求。

2、重復性：對103CFU/mL、10?CFU/mL兩個濃度梯度樣品進行平行檢測，相對標準偏差（RSD）分別為3.2%和2.8%，表明儀器檢測重復性良好。

（四）不同食品基質適應性

在四類食品基質中，博清生物熒光計均表現出穩定的檢測性能。該儀器在加工肉制品和飲料中檢測性能最優，在生鮮食品和乳制品中雖受基質干擾略有影響，但仍滿足快速篩查需求。

四、討論

（一）技術優勢分析

博清生物科技（南京）有限公司研發的熒光計的核心優勢在于“快速”與“便捷”，可有效解決傳統檢測方法的滯后性問題。

1、對于食品生產企業，可實現生產線實時監控，及時發現加工過程中的微生物污染風險，減少因批次污染導致的經濟損失。

2、對于監管機構，在食品安全應急事件中，可快速完成樣品篩查，縮短應急響應時間，提升監管效率。

（二）與傳統方法的互補性

需明確的是，ATP生物發光技術檢測的是所有活細胞的總量，無法區分微生物種類。因此，博清生物熒光計更適合作為快速篩查工具，用于初步判斷樣品是否存在微生物污染超標的風險。當篩查結果顯示異常時，仍需通過傳統平板計數法或分子生物學方法進行進一步的分離鑒定，明確污染微生物種類。

（三）應用局限與改進方向

目前該技術在高基質干擾樣品（如高蛋白、高脂肪食品）中，可能出現熒光信號抑制現象。未來可從兩方面優化：

1、試劑層面：開發針對性的基質消除試劑，降低食品基質對檢測反應的干擾。

2、儀器層面：增加自動校正功能，通過算法補償基質帶來的誤差，進一步提升檢測準確性。

博清生物科技（南京）有限公司研發的熒光計在食品安全微生物快速篩查中具有顯著優勢。其檢測周期短（15-20分鐘）、準確性高（R2>0.98）、靈敏度達標（最低檢測限102CFU/mL），且在多種食品基質中適應性良好。該儀器可作為食品生產過程監控、成品快速放行及應急檢測的高效工具，為食品安全質量控制提供有力支撐。