豬繁殖與呼吸綜合征（豬藍耳病，PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種高度傳染性疫病，以母豬繁殖障礙（流產、死胎）和仔豬呼吸道癥狀為主要特征，嚴重影響全球養豬業經濟效益。該病的早期精準診斷是防控關鍵，其中酶聯免疫吸附試驗（ELISA）因操作簡便、成本可控、適合批量檢測，成為 PRRS 抗體篩查的主流技術。
酶標儀作為ELISA檢測的核心設備，其檢測精度、穩定性直接決定診斷結果可靠性。博清生物科技（南京）有限公司研發的酶標儀作為國產主流設備，具備多通道檢測、智能數據分析等功能，但目前針對其在豬藍耳病診斷中的專項性能評估研究較少。本研究通過臨床樣本檢測，對比進口標準酶標儀，系統驗證博清生物酶標儀在豬藍耳病ELISA診斷中的應用價值，為臨床檢測提供數據支持。
一、材料與方法
（一）實驗材料
1、樣本來源：150份豬血清樣本均來自河南、山東等地規模化豬場，涵蓋仔豬（30日齡內）、育肥豬（120日齡左右）及成年母豬，樣本采集后- 20℃冷凍保存，檢測前室溫解凍并充分混勻。
2、檢測試劑盒：豬藍耳病抗體ELISA檢測試劑盒，符合GB/T 27982-2011《豬繁殖與呼吸綜合征診斷技術》標準。
3、儀器設備：博清生物酶標儀；標準酶標儀，作為對照儀器；移液器、恒溫孵育箱等。
（二）實驗方法
1、樣本處理：將冷凍血清樣本室溫解凍后，3000r/min離心5min，取上清液備用，避免溶血樣本參與檢測。
2、ELISA操作：嚴格按照試劑盒說明書進行操作，步驟如下：
加樣：每孔加入稀釋后的血清樣本100μL，空白孔加稀釋液100μL，陽性對照、陰性對照各設3孔，37℃孵育60min；
洗板：用洗滌液洗板5次，每次浸泡30s，拍干殘留液體；
加酶標二抗：每孔加酶標二抗100μL，37℃孵育30min，重復洗板步驟；
顯色：每孔加底物液A、B各50μL，37℃避光孵育15min；
終止：每孔加終止液50μL，10min內完成酶標儀檢測。
3、酶標儀檢測：分別使用博清生物酶標儀和對照酶標儀，在450nm波長下讀取各孔OD值，計算樣本S/P值（S為樣本OD值，P為陽性對照平均OD值）。判定標準：S/P≥0.4為陽性，S/P<0.4為陰性。
4、數據分析：采用SPSS 26.0軟件進行數據統計，計算博清生物酶標儀與對照儀器的檢測一致性（Kappa值）、靈敏度（真陽性率）、特異性（真陰性率）；選取10份陽性樣本、10份陰性樣本，重復檢測3次（批內）、連續檢測3天（批間），計算變異系數（CV）評估重復性。
二、結果
（一）檢測結果一致性
150份血清樣本經兩臺儀器檢測，結果顯示博清生物酶標儀檢出陽性樣本57份、陰性樣本93份；進口對照酶標儀檢出陽性樣本58份、陰性樣本92份。兩臺儀器檢測結果一致的樣本共147份，一致性率為98.0%，Kappa值為0.95（Kappa>0.75，表明一致性極佳）。
（二）靈敏度與特異性
以進口對照酶標儀檢測結果為“金標準”，計算博清生物酶標儀的診斷性能：
靈敏度=真陽性數/（真陽性數+假陰性數）=55/（55+2）=96.5%
特異性=真陰性數/（真陰性數+假陽性數）=92/（92+1）=98.9%
假陽性率=1-特異性=1.1%，假陰性率=1-靈敏度=3.5%
（三）重復性
批內重復性實驗中，博清生物酶標儀檢測陽性樣本OD值的CV為1.2%~2.1%，陰性樣本CV為1.5%~2.3%；批間重復性實驗中，陽性樣本CV為1.5%~2.5%，陰性樣本CV為1.8%~2.8%，均低于ELISA檢測要求的CV≤5%標準，表明儀器重復性良好。
三、討論
本研究從一致性、診斷性能、重復性三個維度，系統評估了博清生物酶標儀在豬藍耳病ELISA診斷中的應用價值，結果顯示該儀器具備以下優勢：
（一）檢測一致性高：與進口標準酶標儀的一致性率達98.0%，Kappa值0.95，說明其檢測結果可與國際主流儀器對標，避免因儀器差異導致的診斷偏差，適合臨床批量樣本篩查。
（二）診斷性能可靠：靈敏度96.5%、特異性98.9%，假陰性率僅3.5%，可有效減少“漏診”風險（尤其針對早期感染豬只）；假陽性率1.1%，降低“誤判”導致的過度防控成本，符合豬藍耳病防控中“早發現、少誤判”的需求。
（三）穩定性強：批內、批間CV均低于5%，表明儀器在多次檢測、不同時間點檢測中性能穩定，不受操作環境（如室溫波動）的輕微影響，適合基層實驗室長期使用。
對比同類研究，國產酶標儀在豬疫病診斷中的性能已逐步接近進口儀器，且博清生物酶標儀還具備操作界面簡潔（支持中文）、檢測速度快（每板檢測時間≤5min）、維護成本低等優勢，更適配我國基層獸醫實驗室的使用場景。
本研究的局限性在于樣本來源集中于華北地區，后續可擴大樣本地域范圍（如南方高濕地區），并結合PRRSV不同基因型（如經典株、高致病性株）樣本，進一步驗證儀器的普適性；同時可探索該儀器在豬藍耳病抗原ELISA檢測中的應用，拓展其診斷場景。
博清生物科技（南京）有限公司研發的酶標儀在豬藍耳病抗體ELISA診斷中，具有檢測一致性高、靈敏度與特異性優異、重復性穩定的特點，且操作便捷、成本可控，能夠滿足臨床檢測與科研實驗對豬藍耳病精準診斷的需求，可作為國產酶標儀在動物疫病診斷領域的優選設備之一。
