一、禽流感流行現(xiàn)狀與防控需求

禽流感是由正黏病毒科A型流感病毒引起的一類禽類傳染病的總稱，根據(jù)病毒致病性可分為高致病性、低致病性和非致病性三類。其中高致病性禽流感發(fā)病急、傳播快，病死率可達100%，一旦暴發(fā)會導致禽類大規(guī)模死亡，給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨額經(jīng)濟損失。同時，H5N1、H7N9等亞型禽流感病毒可突破種間屏障感染人類，引發(fā)重癥肺炎甚至死亡，構(gòu)成嚴重的公共衛(wèi)生威脅。因此，建立快速、準確、高效的診斷技術(shù)體系，實現(xiàn)禽流感的早期發(fā)現(xiàn)、精準防控，對保障養(yǎng)殖業(yè)安全和公共衛(wèi)生安全具有重要意義。

二、傳統(tǒng)禽流感診斷方法的局限

目前禽流感診斷方法主要包括病毒分離培養(yǎng)、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR）、血清學檢測等。病毒分離培養(yǎng)作為金標準，具有特異性強的優(yōu)勢，但操作復雜、培養(yǎng)周期長（需3-7天），且對實驗室生物安全等級要求高，難以滿足現(xiàn)場快速診斷需求；RT-PCR技術(shù)靈敏度高、特異性好，但依賴精密的核酸提取與擴增設備，試劑成本較高，對操作人員專業(yè)技能要求嚴格，在基層實驗室推廣受限；傳統(tǒng)血清學方法如血凝抑制試驗（HI）操作繁瑣，主觀性較強，檢測效率低，無法適應大規(guī)模樣本篩查。

三、材料與方法

（一）實驗材料

1、樣本來源：收集近年來自全國5個禽類養(yǎng)殖主產(chǎn)區(qū)的臨床樣本共320份，包括雞血清210份、鴨血清70份、鵝血清40份，所有樣本均經(jīng)冷鏈運輸至實驗室，-20℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/span>

2、試劑：禽流感病毒（H5+H7亞型）抗體檢測ELISA試劑盒，包含包被抗原板、酶標二抗、陽性對照血清、陰性對照血清、底物溶液 A/B、終止液等；磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4）、吐溫-20等均為分析純試劑。

3、儀器：博清生物酶標儀；恒溫水浴鍋；移液器；離心機。

（二）實驗方法

1、樣本預處理：將冷凍保存的血清樣本室溫解凍后，3000r/min離心5min，取上清液備用，避免溶血樣本納入檢測。

2、ELISA檢測操作：嚴格按照試劑盒說明書及博清生物酶標儀操作指南進行實驗。①加樣：將陽性對照、陰性對照各設3個重復孔，待檢樣本設2個重復孔，每孔加入100μL 對應血清樣本，37℃孵育60min；②洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用含0.05% 吐溫-20的PBS緩沖液洗滌5次，每次浸泡30s，拍干；③加酶標二抗：每孔加入100μL 酶標二抗，37℃孵育30min，重復洗滌步驟；④顯色：每孔依次加入50μL底物溶液A和B，避光37℃孵育15min；⑤終止：每孔加入50μL終止液，輕輕振蕩混勻。

3、儀器檢測參數(shù)設置：使用博清生物酶標儀。通過儀器自帶數(shù)據(jù)分析軟件，以（待檢樣本OD值/陽性對照OD值）×100%計算S/P值，S/P≥0.4判定為陽性，S/P<0.4判定為陰性。

4、對比實驗：采用病毒分離培養(yǎng)法（金標準）和RT-PCR法對所有樣本進行平行檢測，以金標準檢測結(jié)果為參照，計算博清生物酶標儀的診斷性能指標。

5、重復性試驗：選取10份陽性樣本和10份陰性樣本，在同一批次內(nèi)連續(xù)檢測3次（批內(nèi)重復），并在不同日期檢測3次（批間重復），計算各樣本OD值的變異系數(shù)（CV），評估儀器檢測重復性。

（三）數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 26.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，變異系數(shù)計算采用 CV=（標準差/均數(shù)）×100%。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

四、結(jié)果

（一）博清生物酶標儀檢測結(jié)果與金標準的一致性

320份臨床樣本經(jīng)病毒分離培養(yǎng)法檢測，陽性樣本122份，陰性樣本198份。博清生物酶標儀檢測出陽性樣本120份，陰性樣本197份，其中真陽性120份，真陰性195份，假陽性3份，假陰性2份。診斷靈敏度為98.3%（120/122），特異性為97.8%（195/198），陽性預測值為97.6%（120/123），陰性預測值為98.5%（195/198），總符合率為98.0%（315/320）。Kappa一致性檢驗顯示，Kappa值=0.958（P<0.001），表明博清生物酶標儀檢測結(jié)果與金標準具有極高的一致性。

（二）檢測靈敏度與特異性分析

對10份梯度稀釋的禽流感病毒陽性血清（稀釋度1:100至1:12800）進行檢測，博清生物酶標儀可穩(wěn)定檢出最低稀釋度為1:6400的陽性樣本，而傳統(tǒng)HI試驗僅能檢出1:1600及以上稀釋度樣本，表明其靈敏度顯著高于傳統(tǒng)血清學方法。特異性試驗中，采用新城疫病毒、傳染性支氣管炎病毒、鴨瘟病毒等8種常見禽類疫病陽性血清進行檢測，博清生物酶標儀均檢出為陰性，無交叉反應，特異性達100%。

（三）重復性試驗結(jié)果

批內(nèi)重復性試驗中，20份樣本OD值的CV范圍為1.2%-2.8%，平均CV為1.9%；批間重復性試驗中，CV范圍為2.5%-4.6%，平均CV為3.7%，均低于ELISA檢測技術(shù)規(guī)范中CV≤5% 的要求，表明博清生物酶標儀檢測結(jié)果具有良好的穩(wěn)定性與重復性。

五、討論

（一）博清生物酶標儀的核心性能優(yōu)勢

本研究結(jié)果表明，博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的酶標儀在禽流感診斷中表現(xiàn)出優(yōu)異的綜合性能。其高靈敏度得益于儀器采用的8通道光纖檢測系統(tǒng)，可實現(xiàn)對微弱光信號的精準捕捉，結(jié)合雙波長檢測模式有效剔除背景干擾，使得低濃度抗體樣本得以準確檢出，這對于禽流感早期感染的發(fā)現(xiàn)及疫情預警具有重要意義。在特異性方面，儀器通過優(yōu)化光學系統(tǒng)設計及信號處理算法，有效避免了交叉反應導致的誤診，為診斷結(jié)果的可靠性提供了保障。

重復性作為衡量檢測設備穩(wěn)定性的關(guān)鍵指標，博清生物酶標儀在批內(nèi)及批間試驗中均表現(xiàn)出較低的變異系數(shù)，這與其采用的高精度加樣控制技術(shù)及恒溫孵育系統(tǒng)密切相關(guān)。儀器自帶的智能化數(shù)據(jù)分析軟件可自動完成數(shù)據(jù)讀取、計算及結(jié)果判定，減少了人工操作誤差，進一步提升了檢測結(jié)果的一致性。此外，該儀器操作界面簡潔直觀，無需專業(yè)技術(shù)人員即可快速掌握，且檢測成本顯著低于RT-PCR法，更適合基層實驗室及大規(guī)模流行病學調(diào)查場景的應用。

（二）與同類診斷技術(shù)的對比價值

相較于傳統(tǒng)診斷方法，博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的酶標儀結(jié)合ELISA技術(shù)的診斷方案在效率、成本及適用性方面具有明顯優(yōu)勢。病毒分離培養(yǎng)法雖為金標準，但操作復雜且周期長，無法滿足疫情應急處置的快速響應需求；RT-PCR技術(shù)雖靈敏度高，但依賴昂貴的儀器設備及試劑，且對實驗室環(huán)境及操作人員技能要求嚴格，難以在基層防疫機構(gòu)普及。博清生物酶標儀實現(xiàn)了“高性能-低成本-易操作”的平衡，單次檢測成本僅為RT-PCR法的1/3，且檢測周期縮短近40%，能夠有效填補基層禽流感診斷技術(shù)的短板。

與同類酶標儀產(chǎn)品相比，博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的酶標儀在光學精度及智能化程度上表現(xiàn)突出。其波長精度達±2nm，吸光度分辨率為0.001A，優(yōu)于行業(yè)平均水平（波長精度±3nm，分辨率0.005A），確保了檢測結(jié)果的準確性；自帶的樣本信息管理系統(tǒng)可實現(xiàn)檢測數(shù)據(jù)的自動存儲、導出及追溯，符合實驗室信息化管理需求。此外，儀器采用的長壽命光源系統(tǒng)（使用壽命≥10000小時）降低了后期維護成本，進一步提升了產(chǎn)品的性價比。

（三）實際應用中的優(yōu)化方向與前景

在實際應用中，檢測結(jié)果的準確性除依賴儀器性能外，還與試劑盒質(zhì)量、樣本處理流程密切相關(guān)。因此，建議在使用博清生物酶標儀進行禽流感診斷時，選擇經(jīng)過國家獸藥GMP認證的ELISA試劑盒，并嚴格按照標準操作流程進行樣本預處理及檢測操作，以確保結(jié)果可靠。對于復雜基質(zhì)樣本（如嚴重溶血或脂血血清），可通過儀器軟件的背景校正功能進一步降低干擾，提升檢測準確性。

隨著禽流感防控工作的常態(tài)化推進，對快速診斷技術(shù)的需求將持續(xù)增長。博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的酶標儀可進一步拓展應用場景，如結(jié)合多重ELISA技術(shù)實現(xiàn)多亞型禽流感病毒的同步檢測，或與便攜式檢測設備聯(lián)用開發(fā)現(xiàn)場快速診斷系統(tǒng)。未來，通過整合人工智能算法，有望實現(xiàn)檢測數(shù)據(jù)的實時分析及疫情趨勢預測，為禽流感精準防控提供更有力的技術(shù)支撐。

本研究通過系統(tǒng)的性能評估證實，博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的酶標儀在禽流感診斷中具有靈敏度高、特異性強、重復性好、檢測效率高的特點，與金標準檢測結(jié)果具有極高的一致性，且操作簡便、成本適中，能夠滿足基層實驗室臨床診斷、流行病學調(diào)查及大規(guī)模樣本篩查的需求。該儀器的推廣應用將有效提升我國禽流感疫情的早期發(fā)現(xiàn)能力和應急處置效率，為養(yǎng)殖業(yè)安全及公共衛(wèi)生安全提供重要技術(shù)保障。